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BCR/ABL融合基因检测—CML诊断的“黄金标准”
90%以上慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia, CML)患者有恒定的、特征性的Ph染色体及其分子标志BCR/ABL融合基因。易位类型绝大多数为t(9;22)(q34;q11)的典型易位,少数有变异易位,包括22号与非9号染色体间的简单变异易位,3条或更多条染色体间的复杂易位(隐匿易位)。

检测意义:
1.       辅助诊断:t(9;22)(q34;q11)易位形成的BCR/ABL融合基因是CML的标志,95%CML患者可检测出典型的t(9;22)(q34;q11)易位,约5%的CML患者通过核型分析难以检测到Ph染色体,但可检测出融合基因存在,仍被归为Ph+ CML分类。

FISH检测直观展现的多信号类型具有其它检测方法不可及之临床价值
[Dewald GW et al. (1998) .Blood, 91:3357-3365.]

2.       指导用药:对初诊患者进行BCR/ABL检测,可以进行酪氨酸激酶抑制剂(包括Imatinib/Dasatinib/Nilotibib等)受益人群筛查。2001年5月美国食品药物管理局批准伊马替尼以商品名格列卫®(Glivec®)(甲磺酸伊马替尼片)上市。格列卫可用于治疗费城染色体阳性的慢性髓性白血病(Ph+ CML)的慢性期、加速期或急变期。

甲磺酸伊马替尼作用机制(NCCN Guidelines for patientsTM Version 1.2011)

3.       治疗监测:Ph染色体存在于CML的整个病程中,治疗缓解后,仍持续存在,只有消除Ph阳性克隆,才能达到最终治愈。《慢性髓性白血病治疗专家共识(2010版)》中强调CML治疗需达到细胞遗传学甚至分子学反应。FISH方法是监测细胞遗传学反应的重要方法,在治疗期间可实时反映患者体内BCR/ABL融合基因细胞量的动态变化,用于后续的治疗方案选择及药物使用效果评估。

FISH探针类型


FISH方法检测融合基因的优势:
 
1. PCR法: PCR检测灵敏度高,但只能用于已知转录本的检测,像BCR和ABL断裂位点多、易位类型复杂,有些未知的易位形式检测不出来。同时PCR方法只能检测很小范围内的基因序列,而当基因序列发生变异时,易出现假阴性结果。大约有5%的BCR/ABL融合基因不是常见的序列。此外,标本保存质量、检测试剂灵敏度等因素影响,均可能导致假阴性情况发生。
2. 核型分析:常规核型分析的灵敏度低,有典型的ph染色体易位可以检测出来,需要对样本进行细胞培养,受制于中期染色体质量;对于不典型易位或隐匿型易位较难检测,需要通过FISH检测。
3.荧光原位杂交(FISH):可用于外周血或骨髓间期细胞中BCR/ABL融合基因检测,不需要细胞培养或DNA提取。采用双色探针直接靶定断裂点两端,具有敏感,特异,高效和重复性好的特点,它能揭示传统的细胞遗传学分析或由血液或骨髓形态学检查未检出的亚微观异常。检测结果直观,不同信号类型体现易位方式差异,利于临床分析。
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